安可胶对BALB/c小鼠的免疫原性影响,本文是有关免疫大学毕业论文范文跟安可和安可胶和小鼠方面硕士学位毕业论文范文.
免疫论文参考文献：
司 玮1 许辞中2 刘 晶3
1 南京市食品药品监督检验院 江苏省南京市 210000 2 南京市餐饮服务食品安全监督所 江苏省南京市 2100003 江苏省药物研究所 江苏省南京市 210000
【摘 要】目的：研究安可胶的免疫原性和免疫效果,为该药物安全评价和进一步优化提供实验依据.方法：安可胶是模仿凝血机制的最后共同通路设计成的止血制剂,自2015 年2 月至2015 年8 月,本研究在江苏省药物安评中心进行,按临床等效剂量设高中低剂量组及空白对照,通过对32 例BALB/c 小鼠免疫器官质量及脏器指数分析、噻唑蓝(MTT) 比色法检测脾淋巴细胞增殖、氯化硝基四氮唑蓝(NTB) 还原法检测中性粒细胞吞噬能力,揭示安可胶对小鼠免疫系统的影响.结果：小鼠免疫器官质量及脏器指数均未发生明显改变；与对照组相比,各组小鼠淋巴细胞增殖指数无明显差异,试验组中性粒细胞吞噬功能显著性增强,粒细胞吞噬百分率升高,与阴性组相比,有极显著统计学差异.结论：安可胶可增加脾细胞的转化能力,并对小鼠免疫器官重量有影响,但在小鼠体内未表现出特异性免疫反应.
【关键词】安可胶；免疫原性抗体；抗凝
安可胶是模仿凝血机制的最后共同通路设计成的止血制剂,由两种成分组成,A 液含较高浓度的纤维蛋白原和XIII 因子,B 液含钙离子和凝血酶,两液混合后纤维蛋白原和凝血酶接触,形成类似外凝血过程的最后阶段,产生可溶性多聚体纤维蛋白网,发挥止血封闭作用,并能有效促进创面愈合[1、2].但由于本品来源于哺乳动物的血清,因此其免疫原性研究对该品种在临床上的安全应用及推广显得尤为重要.自2015 年2 月起,至2015 年8 月,本研究对安可胶进行免疫原性试验,观察其对32 例BALB/c 小鼠免疫系统的影响,为临床用药安全提供参考依据.
1 材料
1.1 实验动物
BALB/c 小鼠：SPF 级32 只18-21g,随机分成4 组,每组8 只,雌雄各半.
1.2 主要试剂
刀豆蛋白A（ConA）：SIGMA 公司提供；脂多糖（LPS）：SIGMA 公司提供；四偶氮唑兰（MTT）：Amresco 公司提供；氯化硝基四氮唑蓝（NBT）：上海灵锦精细化工有限公司提供；十二烷基磺酸钠（SDS）：Amresco 公司提供； 番红花红T：上海灵锦精细化工有限公司提供.
2 试验方法
2.1 给药方法及检测
采用安可胶100 mg/kg、 50 mg/kg、25 mg/kg、阴性对照4 组,注射给药后第7天,采抗凝血0.5 ml,加入等量的NBT溶液.番红花红T 染色,洗涤,干燥,油镜检测.血涂片中嗜中性粒细胞能还原NBT10% 以下,为NBT 试验阴性,10% 以上则为阳性.
2.2 免疫器官重量
给药第7 天称体重,取胸腺、脾脏称重,计算免疫器官指数[3].
胸腺或脾脏指数 等于
2.3 小鼠T、B 淋巴细胞转化试验
给药第7 天,脾脏剪碎后过200 目不锈钢筛网,用PBS 预冷冲洗后收集细胞悬液,以1000 rpm 离心5min,弃上清液,用 NH4Cl 裂解红细胞,重复离心弃上清后,用完全培养基调细胞浓度至1.0×106/ml, 96 孔板内每孔加入180ul.每只动物设PBS 对照孔、ConA 刺激孔(ConA 终浓度10ug/ml)、LPS 刺激孔(LPS 终浓度10ug/ml).在37 ℃ 下孵育48 h, 弃上清100ul,加入10ul MTT 工作液,加入100ul10% SDS 裂解结晶紫颗粒,于570 nm 波长紫外测A570 值,并计算细胞增殖指数（Proliferation index,Prol.）[3、4].
2.4 统计方法
采用SPSS12.0 软件中one-wayANOVA 进行统计学分析.结果P<0.05 表示有统计学意义.
3 结果
3.1 安可胶对免疫器官指数的影响
由表1 可以看出,给于安可胶后,小鼠的胸腺和脾脏重量有一定程度的增加,但与阴性对照组相比,差异不很明显.
3.2 安可胶对脾细胞转化的影响
细胞增殖实验表明,给于安可胶后,脾细胞在ConA 诱导下,增殖能力增强,增殖指数有一定程度的增加,但与阴性对照组相比,无统计学差异（见表2）.
3.3 安可胶对嗜中性粒细胞功能的影响
嗜中性粒细胞还原NBT 试验结果表明,安可胶能明显增强嗜中性粒细胞的吞噬功能,与空白组相比,差异极显著（见表3）.
4 结论
在临床上安可胶可与凝血酶混合使用形成纤维蛋白,在临床外科止血、组织创伤修复等都有非常好的作用.因有生物相容性好,缓释作用强和无毒性等优点已被广泛应用[5].安可胶作为类似生物制品发展前景乐观,但尚有许多问题待解决：其中最重要是对其有效性和安全性的研究.本试验采用了BALB/C 小鼠动物模型来评价其对免疫原性和免疫系统的刺况.
雷静等研究表明,小鼠体内的纤维蛋白胶主要影响凝血系统,对免疫系统的脾脏也有影响,可能存在潜在的免疫毒性[6].本研究为了有效的考量安可胶的安全性,设计通过小鼠腹腔局部注射安可胶并测定免疫后动物脏器指数,以了解相应免疫原性及免疫毒性强弱.给药后小鼠主要免疫器官脏器增重及指数与阴性对照组相比变化不明显,均无统计学差异.表明在小鼠体内该制剂对其免疫器官的影响程度不髙,且与剂量无关.
在前期的研究中有结果提示,纤维蛋白可主要通过淋巴细胞介导特异性免疫反应[7],纤维蛋白原对小鼠成纤维细胞以及兔皮肤可能有一定的毒性作用[8].但在本研究中,ConA 作为一种有丝分裂原,可诱导淋巴细胞产生细胞毒性作用.再通过MTT 试验进行检测其增殖转化程度,用酶标仪测定ConA 和LPS 等指标,其光吸收值即可间接反映活细胞数量.MTT 结晶形成的量与细胞数在一定细胞数范围内,也可以反应与该细胞的增殖程度成正比.在本实验最终结果中,各组小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力和阴性对照组小鼠脾脏淋巴细胞增值能力基本相当.与阴性对照组相比,对脾脏器官重量及脾细胞转化均稍有升高,但无统计学差异.说明安可胶刺激小鼠免疫应答不明显,对其特异性免疫影响很小,且与用药具体剂量无关性,从而也说明了其具有一定的安全性.
中性粒细胞在体内发挥吞噬病菌的功能,小鼠体内的中性粒细胞吞噬功能增强,在本研究的结果中,安可胶对可使嗜中性粒细胞功能明显增强,各给药组粒细胞吞噬百分率与阴性对照组相比显著增加,统计结果有极显著差异.这也提示安可胶是异源蛋白,在小鼠体内可引起非特异性免疫作用.小鼠试验安可胶在体内所表现的特异性免疫反应不明显.
综上所述,本研究在小鼠体内未表现出特异性免疫反应,但可部分预测安可胶对人的免疫原性反应,对于临床应用亦可作为参考和提示.
参考文献
[1]Rousou JA.Use of fibrin sealantsi n c a r d i o v a s c u l a r s u r g e r y : asystematic review[J]. J Card Surg,2013,28(03):238-247.
[2]Mackenzie-Dyck S,Latimer L,AtanleyE,et al.Immunogenicity of a bovineerpesvirus 1 glycoprotein D DNAvaccine complexed with bovineneutrophil beta-defensin 3[J].ClinVaccine Immunol,2015,22(01):79-90.
[3] 朱彩云等. 医用生物蛋白胶及其主体成分纤维蛋白原的免疫原性研究[J].现代免疫学,2008,28(01).
[4]Umthong S,Buaklin A,Jacquet A,etal.Immunogenicity of a DNA andr e c o m b i n a n t p r o t e i n v a c c i n ecombining lipL32and loa22 forleptospirosis using chitosan asa delivery system[J].MicrobiolBiotechnol,2015,25(4):526-536.
[5]Laidmae I,Belozjorova J,SawyerES, et al,Salmon fibrin gluein rats: antibody studies[J].Biologicals,2013,40(01):55-60.
[6] 雷静, 李奕恒, 刘旭昭等. 动物源Ⅰ型胶原蛋白可引起BALB/c 小鼠细胞免疫反应和组织免疫毒性[J]. 中国组织工程研究,2015,19(34):5506-5512.[7]Bondioli E, Fini M,Veronesi F,etal.Development and evaluation ofa decellularized membrane fromhuman dermis[J].Tissue Eng RegenMed,2014,8(04):325-336.
[ 8 ] M o o r e M A , S a m s e l l B , W a l l i sG , e t a l , D e c e l l u l a r i z a t i o no f h u m a n d e r m i s u s i n g n o n -denaturing anionic detergent andendonuclease: a review[J].CellTissue Bank,2015,16(02):249-259.
作者简介
司玮（1981-）,女,江苏省南京市人.硕士学位.现为南京市食品药品监督检验院工程师,主要从事食品药品安全研究工作.
通讯作者简介
刘晶（1973-）,男,江苏省盐城市人.硕士学位.现为南京市餐饮服务食品安全监督所研究员,主要从事食品药品安全研究工作.
汇总，上文是一篇关于对不知道怎么写安可和安可胶和小鼠论文范文课题研究的大学硕士、免疫本科毕业论文免疫论文开题报告范文和文献综述及职称论文的作为参考文献资料.
安以轩的胶原冻龄术
文／楚云Excuseme从2011年就开始恨嫁的安以轩终于把自己嫁出去了！一时间简直四海来贺,八荒同赞 从斗鱼到仙剑奇侠传,再到即将播出的独孤天下,荧幕上的安以轩一直少女感十足,仿佛冻龄了一般 本期让.
地缘政治往安倍欧洲外交完败
日本日刊现代1月16日就﹃安倍外交﹄进行了抨击 报道称,日本首相安倍晋三1月12日展开了对波罗的海三国以及保加利亚、塞尔维亚、罗马尼亚……欧洲六国的访问,这是安倍作为日本首相首次访问上述国家,其目的之.
安龙四举措狠抓离退休干部工作
安龙县结合新时代离退休干部、关工委、老年教育和老年人体育工作要求,对2018 年工作进行认真谋划,突出“四举措”全力抓实抓好离退休干部工作 强化理论武装,提高政治站位安龙县为认.
普安县成立惠民小区易地扶贫安置点关爱服务站
2月1日,由中国、普安县脱贫攻坚指挥部援建,县关工委、团县委、县民政局、县、县义工联合会……单位共建的普安县惠民小区易地扶贫安置点“关工委工作服务站”和“壹乐园&m.